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原理:将样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时,基质从激光中吸收能量,样品解吸附,基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离,电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测,即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子,并测得样品分子的分子量。例如,检测DNA样品时,DNA离子按其质量大小先后通过检测器,DNA片段越短,越早到达检测器。
MALDI-TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点,为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段,并正扮演着越来越重要的作用。仪器主要两部分:基质辅助激光解析电离离子源(MALDI)和飞行时间质量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子,而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道,离子质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比,通过到达检测器的飞行时间不同而检测离子。质谱(MS)通过分析分子离子的质量电荷比(m/z)来鉴定和定量检测分子,质谱仪内的质谱可以解释为测定一个样本内不同分子的特性,质谱仪可以直接分析任何易电离的生物分子。
基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)结合了两个技术,包括基质辅助激光解吸/电离(MALDI)离子源和飞行时间质谱(TOF)。基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的概念,质谱完全改变了临床微生物室中的微生物的鉴定方法,因为它是一个快速、高通量、低成本的以及高效的系统。样品种类一般为:蛋白质、核酸、多肽、大分子等。依据测试结果分为:低分辨和高分辨,低分辨精确到小数点后1位,高分辨精确到小数点后4位。
测试模式:有线性模式和反射模式,线性模式适合大分子(如蛋白质,核算,多聚物等),此模式分辨率和质量准确度低于反射模式,通常测得的为平均分子量。反射模式适合分子量<5000Da的物质,如多肽,寡糖等,该模式分辨率高,可准确测得单同位素分子量。模式下面又分为:正离子和负离子模式,分子结构不同,有的更容易带正电,有的更容易带负电,正离子看的是带正电的离子,负离子看的是带负电的离子。常规是正离子模式。常用的测试基质为:CHCA、 DHB、SA、TCNQ和DCTB。溶剂:水、甲醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、四氢呋喃、丙酮、乙醚、甲苯等。
MALDI-TOF-MS (科研测试站)
(科研测试站)