测序法是一种用于鉴定蛋白质序列的测序技术。纯化好蛋白质后，确认需要检测的某个序列，并把这个序列还原成更小的片段（如果要测的蛋白质很大的话，那就需要将蛋白质还原成更小更小的片段）之后，就可以使用Edman测序法来检测蛋白序列了。Edman测序法可以直接分析氨基酸信息，并且不需要借助任何蛋白质数据库，因此，Edman测序可以对全新的没有数据库信息的蛋白质进行N端序列分析。Edman化学降解法是蛋白质N-端测序技术的关键技术，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂（PITC）与蛋白质的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质N端裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，然后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。尽管Edman法技术已应用较多，但仍有不足之处，例如Edman降解法不能解决N端封闭的测序问题（环化、封闭）、被修饰的蛋白不能给出确切的信号，铭研生物在此技术基础上加入质谱法，质谱法不受N末端封闭的限制，能对侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位，灵敏度有提高，因而具有其优点，与传统的Edman降解法相互补。

          N端测序 （科研测试站）

1.样品状态：可以是干粉，溶液（不接受PVDF膜样品）；

2.样品浓度及纯度：总量>200ug 纯度>90% 浓度>0.5mg/ml；

3.如需测试氨基酸个数比较多，建议总量在2mg-3mg，纯度95%或以上，浓度1mg/ml

4.含盐量：挥发性无机盐<20 mM,不挥发性无机盐< 5mM,建议不使用Tris缓冲体系，建议提供样品的理论序列

5.测序样品不返还，请保留备份

1.不确定样品的N端是否封闭怎么办？

可以按照正常流程测试，但是会影响实验结果，这种情况下我们是正常收费的，请理解。

2.蛋白纯度没有95%，只有92%可以吗？

可以尝试，但本平台无法保证结果符合预期。

3.Edman测序是如何进行的？

1. 耦合（Coupling），使用异硫氰酸苯酯（也称为PITC）与蛋白样品进行反应。这种试剂的作用是在温和的碱性条件下与氨基的N端反应，形成苯硫氨酰（PTC）加合物;

PITC结构图

2. 分离（Cleavage），在强酸的作用下，对N末端氨基进行切割。因为每次只切除末端的最后一个氨基，循环进行，直到切除最后一个氨基，即可获取全部序列信息;

3. 转换（Conversion），将与PITC结合的残基转化成更稳定的PTH残基，进行后续测定步骤（这步使得结构变得更稳定）。

原理图：

（科研测试站）