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荧光分析就是基于物质的光致发光现象而产生的荧光的特性及其强度进行物质的定性和定量的分析方法。目前,也广泛地作为一种表征技术来研究体系的物理、化学性质及其变化情况,例如生物大分子构象及性质的研究。适用于固体粉末、晶体、薄膜、液体等样品的分析。根据样品分别选配石英池(液体样品)或固体样品架(粉末或片状样品)。荧光分析的优点:(1)灵敏度高;(2)选择性强;(3)试样量少、方法简单;(4)提供较多的物理参数。但是也存在应用范围不够广泛、对环境敏感(干扰因素多)等缺点。在吸收紫外和可见电磁辐射的过程中,分子受激跃迁至激发电子态,大多数分子将通过与其它分子的碰撞以热的方式散发掉这部分能量,部分分子以光的形式放射出这部分能量,放射光的波长不同于所吸收辐射的波长。后一种过程称作光致发光。分子发光包括荧光、磷光、化学发光、生物发光和散射光谱等。基于化合物的荧光测量而建立起来的分析方法称为分子荧光光谱法。被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪。一个激发,一个发射,采用双单色器系统,可分别测量激发光谱和荧光光谱。任何荧光化合物都具有两个特征光谱:激发光谱和发射光谱。激发光谱反映了某一固定的发射波长下所测量的荧光强度对激发波长的依赖关系;发射光谱反映了某一固定激发波长下所测量的荧光的波长分布。
荧光光谱能够提供激发谱、发射谱、峰位、峰强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振度等信息,荧光分析定性和定量的基础。荧光分析就是基于物质的光致发光现象而产生的荧光的特性及其强度进行物质的定性和定量的分析方法。目前,也广泛地作为一种表征技术来研究体系的物理、化学性质及其变化情况,例如生物大分子构象及性质的研究。荧光光谱适用于固体粉末、晶体、薄膜、液体等样品的分析。根据样品分别选配石英池(液体样品)或固体样品架(粉末或片状样品)。
稳态/瞬态荧光光谱仪-科研测试站
7.荧光分析有哪些优点?
(1)灵敏度高;(2)选择性强;(3)试样量少、方法简单;(4)提供较多的物理参数。但是也存在应用范围不够广泛、对环境敏感(干扰因素多)等缺点。1、定性分析:不同结构荧光化合物都有特征的激发光谱和发射光谱,因此可以将荧光物质的激发光谱与发射光谱的形状、峰位与标准溶液的光谱图进行比较,从而达到定性分析的目的。2、定量分析:在低浓度时,溶液的荧光强度与荧光物质的浓度成正比:F=Kc。其中,F为荧光强度,c为荧光物质浓度,K为比例系数。这就是荧光光谱定量分析的依据。上述关系不适用于荧光物质浓度过高时,荧光物质浓度过高,其荧光强度反而降低。原因有:(1)内滤效应。一是,当溶液浓度过高时,溶液中杂质对入射光的吸收作用增大,相当于降低了激发光的强度。二是,浓度过高时,入射光被液池前部的荧光物质强烈吸收,处于液池中、后部的荧光物质,则因受到入射光大大减弱而使荧光强度大大降低;而仪器的探测窗口通常对准液池中部,从而导致检测到的荧光强度大大降低。(2)相互作用。较高浓度溶液中,可发生溶质间的相互作用,产生荧光物质的激发态分子与其基态分子的二聚物或其他溶质分子的复合物,从而导致荧光光谱的改变和/或荧光强度下降。当浓度更大时,甚至会形成荧光物质的基态分子聚集体,导致荧光强度更严重下降。(3)自淬灭。荧光物质的发射光谱与其吸收光谱呈现重叠,便可能发生所发射的荧光被部分再吸收的现象,导致荧光强度下降。溶液浓度增大时会促使再吸收现象加剧。